媛禧科普—从解剖到染色:小鼠肠道瑞士卷制片技术详解

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结肠瑞士卷制片结合HE染色是病理学中观察肠道全层结构的经典方法。通过将结肠卷曲成瑞士卷形态,可在单一切片中同时展现黏膜层、黏膜下层及肌层的连续病理变化(如炎症、隐窝结构异常等)。该技术尤其适用于小鼠模型肠道疾病研究,为组织病理学分析提供高效、全面的样本支持。


一、解剖与取材





安乐死与解剖使用CO₂或其他伦理方式安乐死小鼠。沿腹中线打开腹腔,暴露结肠,用镊子轻柔分离肠系膜,完整取出结肠。结肠处理纵向剪开结肠,用预冷的PBS冲洗干净内容物。



将结肠平铺于滤纸上(黏膜面朝上),用细镊子或棉签辅助卷成瑞士卷(类似蛋糕卷形状)。用湿滤纸包裹卷好的组织,避免干燥。



二、固定与脱水


卷完后的小鼠结肠瑞士卷


固定将瑞士卷浸入4%多聚甲醛中,4℃固定12-24小时(确保充分固定)。
脱水梯度酒精脱水(每步1小时):
70%乙醇 → 80%乙醇 → 95%乙醇(Ⅰ、Ⅱ) → 100%乙醇(Ⅰ、Ⅱ)。

常规固定、脱水、透明、浸蜡处理即可



三、透明与浸蜡


瑞士卷石蜡包埋


透明化二甲苯(或替代试剂)透明:Ⅰ、Ⅱ缸各30分钟。

浸蜡将组织浸入熔化的石蜡(60-65℃)中:将已浸透石蜡的组织块置入包埋模具内,再倒入新融化的石蜡,染色将其至于冻台,使其迅速冷却凝固。(包埋时注意将标本的切片朝下,即标本的却面应与包埋器的地面接触)


Ⅰ缸:1小时 → Ⅱ缸:1小时(确保石蜡完全渗透)。



四、包埋与切片制作


正在切片中的小鼠瑞士卷


包埋将浸蜡后的瑞士卷置于包埋盒中,倒入熔化石蜡,冷却固化。切片修整蜡块,用轮转式切片机切成4-5μm薄片,裱贴于载玻片上。



五、HE染色


进一步染色封片


.脱蜡与水化二甲苯脱蜡(Ⅰ、Ⅱ缸各10分钟)。

.梯度酒精水化:100% → 95% → 80% → 70% → 蒸馏水(每步5分钟)。

.苏木精染色: 浸入苏木精染液5-10分钟,流水冲洗

.分化与返蓝1%盐酸酒精分化数秒,流水冲洗15分钟(或氨水返蓝)。

.伊红染色 :浸入伊红染液1-3分钟,水洗。

.脱水与封片:梯度酒精脱水(70% → 80% → 95% → 100%),二甲苯透明,中性树胶封片。



五、制作要点及总结


最终得到的HE染色


瑞士卷制作:黏膜面朝外,避免过度用力导致组织撕裂。


固定时间:不足会导致组织松散,过长可能硬化难切。


染色控制:分化时间需精准,避免核染色过深或过浅。


通过以上步骤,可清晰观察结肠黏膜层、黏膜下层及肌层的病理结构(如隐窝、炎症细胞等)。


小鼠实验为何如此重要?


疾病研究:癌症、遗传病、免疫异常……老鼠模型是破解人类疾病的“钥匙”。


药物开发:新药的安全性、疗效评估,都离不开这些微观数据的支撑。


本流程通过精准的解剖取材、瑞士卷制备、石蜡包埋及HE染色,实现了对小鼠结肠全层结构的完整展示。清晰的苏木精-伊红染色可区分细胞核与胞质,突出黏膜损伤、炎症浸润等关键病理特征。此方法为肠道疾病机制研究、药物疗效评估提供了可靠的技术基础,是病理学与转化医学研究中不可或缺的核心手段。

2025年5月15日 10:20
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